<p style="text-align: center;">刘楠楠，王&nbsp; 宇，张小红，黄士其，周敏杰，景明夷，蔡定均</p><p style="text-align: center;">(成都中医药大学针灸推拿学院，四川成都&nbsp; 610032)</p><p style="text-align: justify;"><strong>摘要</strong>：<strong>研究目的</strong>：人体内营卫阴阳盛亏羸虚、脏腑阴阳相生相克，气血津液运行等会随着时间的变化而出现变化。在此理论基础上总结创立的子午流注针法等与时间医学紧密相关的针法通过在不同时间点针刺某些特定的穴位来获得最佳的疗效。穴位局部的随时间变化可能是导致针灸时间效应差异的重要环节之一。成纤维细胞作为疏松结缔组织中数量最多的细胞，是穴位应答针刺机械刺激的细胞基础。针刺能引起成纤维细胞骨架重构，且具有明显时间特异性。前期研究显示，针刺对局部成纤维细胞骨架形态改变最显著在 ZT12，而最不显著在ZT16。成纤维细胞能够感知和传导机械刺激，将其转化为力学信号从而导致细胞产生一系列生物效应。成纤维细胞的这种信号转导作用得力于其细胞骨架的感受器作用。但是刺激是如何转化成化学信号的分子机制，至今仍然没有定论。P38MAPK 是 MAPK 信号通路中的经典途径，P38MAPK 激酶通过过度磷酸化钙离子结合蛋白中MAP14（S100A9）来抑制 MRP8/MRP14 复合物从而引起微管多聚化。本研究选取较经典的 P38MAPK 蛋白通路，探究针刺机械刺激转化成化学信号的分子机制。研究方法：将健康清洁级 SD 雄性大鼠(体重：180-220g)置于动物节律测试室的隔离单元内进行适应性驯化 7 天后，进行痛阈筛选，选用光辐射热甩尾法测定值在 3s-10s 之间的大鼠用于实验。筛选出符合实验标准的 SD 大鼠 36 只根据基础痛阈随机分为造模组 24 只，空白组12 只。造模组大鼠右侧足垫部皮内注射完全弗氏佐剂 CFA 0.1ml，空白组大鼠于同一部位注射等量生理盐水。造模成功后，再将模型组的 24 只大鼠随机分为模型组 12 只和针刺组 12 只。然后根据处理时间的不同将三个组分别分为 ZT12、ZT16，2 个亚组，每组 6 只。在造模成功的第 2 天，每个时间点的针刺组的大鼠分别在相应时间接受针刺治疗，操作方法为：针刺大鼠右侧足三里穴（ST36），留针 30min，每 5min 捻转行针一次，每次捻转 1min，频率为 120 次/min。空白组和模型组则接受与针刺组相同的捆绑固定，固定时间为 30min，余不做任何处理。连续治疗 7 天后，对大鼠右侧足三里处皮肤及皮下组织进行取材。采用免疫组化的方法检测大叔穴位局部 P38/P-P38 的表达。<strong>研究结果</strong>：本次研究发现，相同时间点不同组之间比较，在 ZT12 时间点，模型组大鼠穴区 P-P38MAPK 和 P38MAPK 表达量均较空白组明显增高，P&lt;0.05；模针组大鼠穴区 P-P38MAPK 和P38MAPK 表达量较模型组明显降低，P&lt;0.05。在 ZT16 时间点，模型组大鼠穴区 P-P38MAPK 和 P38MAPK 表达量均较空白组增高， P&lt;0.05。不同时间点相同组比较，在空白组和模针组， ZT16 时间点大鼠穴区 P-P38MAPK和 P38MAPK 表达量较 ZT12 点时间点增高， P&lt;0.05，模型组大鼠穴区 P-P38MAPK 和 P38MAPK 表达量在 ZR16时间点较 ZT12 时间点明显增高， P&lt;0.05。 <strong>结论</strong>： 炎性疼痛能明显引起大鼠穴位局部皮肤 p38MAPK 及其磷酸化</p><p style="text-align: justify;">P-p38MAPK 表达量的增加，针刺后 p38MAPK 与 P-P38MAPK 蛋白表达量降低。 ZT12 时间点针刺后 P38MAPK水平下降较 ZT16 时间点明显，而同时 ZT12 时间点针刺降低 P-P38MAPK 的幅度弱于 ZT16 时间点可能是针刺对成纤维细胞骨架重构的影响在 ZT12 时间点优于 ZT16 时间点的机制之一。</p><p><strong>关键词</strong>：针灸学；成纤维细胞；骨架重构；信号转导通路&nbsp;</p><p><br/></p>